原位雜交:
原位雜交是指用特定探針定位、檢測(cè)DNA、RNA的一種有效的實(shí)驗(yàn)方法,通過(guò)把特點(diǎn)序列客隆到特殊載體上,通過(guò)轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)一條天然的RNA探針,將探針和切片樣品進(jìn)行雜交,通過(guò)一系列顯色方法,來(lái)確定RNA或者DNA表達(dá)區(qū)域;本中心原位雜交探針采用的是第高辛和生物素標(biāo)記,靈敏度和同位素相當(dāng)。 我們采用roche標(biāo)記及顯色試劑盒,GISH/ISH/FISH按照探針進(jìn)行收費(fèi),每個(gè)試劑盒每條探針可以雜交60-80張玻片,收費(fèi)為1萬(wàn)5千元,GISH雜交因需要加抗淬滅劑每條探針收費(fèi)為1萬(wàn)9千元。量大優(yōu)惠!
原位雜交的基本原理是利用標(biāo)記的核酸探針與細(xì)胞或組織中的DNA或RNA進(jìn)行雜交,然后通過(guò)檢測(cè)標(biāo)記來(lái)識(shí)別探針的位置。這使得研究人員能夠在細(xì)胞或組織中確定特定基因或基因組區(qū)域的位置和表達(dá)水平。
原位雜交可以用于多種類型的實(shí)驗(yàn)。例如,它可以用來(lái)檢測(cè)特定基因在發(fā)育過(guò)程中的表達(dá)模式,或者確定特定基因變異在細(xì)胞中的分布。此外,原位雜交還可以用于診斷疾病,例如某些類型的,以及監(jiān)測(cè)效果。
植物組織原位雜交的步驟包括以下幾個(gè)方面:
1. 制備組織樣品:從植物中取出需要研究的組織樣品,如根、莖、葉等。
2. 固定組織樣品:將組織樣品固定在載玻片上,通常使用或乙醇等化學(xué)物質(zhì)進(jìn)行固定。
3. 處理組織樣品:對(duì)固定的組織樣品進(jìn)行脫水、透明化、脫脂等處理,以便于DNA探針的穿透和結(jié)合。
4. 制備DNA探針:根據(jù)需要研究的基因序列,設(shè)計(jì)并合成DNA探針。DNA探針可以標(biāo)記熒光染料或性同位素,以便于檢測(cè)。
5. 雜交DNA探針:將DNA探針與組織樣品進(jìn)行雜交,通常需要在高溫下進(jìn)行,以便于DNA探針與RNA或DNA結(jié)合。
6. 檢測(cè)雜交信號(hào):通過(guò)熒光顯微鏡或計(jì)數(shù)器等設(shè)備,檢測(cè)DNA探針與RNA或DNA的結(jié)合情況,確定目標(biāo)基因的表達(dá)模式和位置。